【Uso pretendido】

O kit é uma PCR fluorescente em tempo real da sonda TaqMan para detectar qualitativamente o ácido nucleico dos genes ORF1ab, N de 2019-nCoV em swab de garganta, escarro em pacientes com suspeita de sintomas de pneumonia e casos de agrupamento.

Os resultados do teste são apenas para referência clínica e não podem ser considerados apenas como referência para diagnóstico clínico.

Os operadores devem ter experiência de treinamento profissional em amplificação de genes ou testes de métodos de biologia molecular e ter qualificações relevantes para operações de laboratório. O laboratório deve ter precauções de segurança biológica razoáveis e procedimentos de proteção.

【Princípio de Teste】

Neste kit, primers e sondas são projetados para as regiões conservadas e específicas do ORF1ab, N de 2019-nCoV, respectivamente. A PCR fluorescente é usada para detectar o RNA viral após a purificação do ácido nucleico da amostra de RNA.

Este kit de teste usa tecnologia de PCR fluorescente em tempo real. Durante a amplificação por PCR, a sonda se liga ao modelo e o grupo repórter da extremidade 5' da sonda é clivado pela enzima Taq (atividade de exonuclease 5'→3'), assim afastando-se do grupo de extinção para gerar um sinal fluorescente. A curva de amplificação em tempo real é plotada automaticamente com base no sinal de fluorescência detectado e o valor de Ct da amostra é calculado (o número de ciclos experimentados quando o sinal de fluorescência em cada tubo de reação atinge o limite estabelecido). Os fluoróforos FAM, VIC e Texas red são usados para marcar o gene ORF1ab, sondas do gene N em solução de reação. Ao usar um teste, a detecção qualitativa dos dois genes acima de 2019-nCoV pode ser realizada simultaneamente.

Para evitar o resultado falso negativo, o kit é fornecido com um controle interno (IC), marcado com o grupo fluorescente Cy5 que pode ser usado para monitorar o procedimento de extração e a solução de reação.

【Componentes principais】

Observação¹: Os diferentes lotes de componentes não podem ser trocados.

Observação²: O kit de teste não contém reagente de extração de ácido nucleico, prepare o reagente antes de usar.

1. Manuseio de amostras

Adicione 10μL de controle interno em 200μL de controle positivo e controle negativo, respectivamente para realizar a extração de ácido nucleico.

2. Preparação de reagentes:

Preparação do sistema: Pegue o liofilizador de amplificação de ácido nucleico pré-instalado, seguido pela abertura da bolsa de alumínio e centrifugue-a imediatamente. A quantidade de amostra de cada teste deve ser os múltiplos de 8 contendo um controle positivo e um controle negativo. Adicione 35μL de água livre de nuclease em cada tubo de reação.

3. Carregamento de Amostras:

Adicione 5 μL de ácido nucleico da amostra a ser testado, controle positivo, controle negativo de que todo o volume de reação seja de 40 μL na solução de reação alocada. pois não necessita de uma mistura fina, e apenas feche a tampa do tubo de reação de PCR, centrifugue o líquido na parede do tubo na parte inferior do tubo, processando assim a amplificação PCR.

Após a verificação, estima-se que a adição de 5μL-10μL óleo de parafina no sistema de PCR não afetará o resultado da PCR, mas evitará contaminação e vaporização do líquido.